腺相关病毒（ AAVs ）是常见的无害病毒，易感染人类，因此常作为有效的基因治疗载体。对 AAV 为载体的基因治疗而言，准确控制病毒滴度是至关重要的。然而到目前为止，不管是实验室阶段还是生产阶段都缺乏标准化的定量方法。

什么是 AAV ，科学家又是如何应用它们？

腺相关病毒（ AAVs ）是一种感染人类和灵长类动物的病毒。个体非常小（ 直径约 20 nm ），同时病毒复杂性很低，仅由蛋白质衣壳和线性单链 DNA 基因组组成，在没有其他病毒帮助下，无法完成复制。虽然 AAV 在大多数人中会引起轻微的免疫反应，但目前尚不清楚它们是否会导致其他疾病。它们在人群中也很常见，大约 50% - 80% 的人群表现出针对 AAV 衣壳蛋白的血清抗体阳性[1]。

以上特征也使 AAV 血清型（ 特别是 AAV2 ）成为基因治疗的绝佳候选物，将病毒为载体递送的“健康”的基因拷贝替换“错误”的拷贝，来治疗疾病和遗传性疾病[2]。

什么是 AAV 定量？

只有对 AAV 进行准确的表征和定量，才能实现安全有效的 AAV 基因疗法的开发[5]。

第一个欧洲批准的基于 AAV 的基因治疗产品已经退市，部分原因是成本问题，这反映了该疗法对 AAV 载体高效制造和下游加工的需求[6]，这就需要标准化的方法来定量和表征 AAV 载体。

AAV 定量的挑战

目前已经有多种方法来定量 AAV 衣壳和基因组滴度，包括酶联免疫吸附测定（ ELISA ）、定量聚合酶链式反应（ qPCR ）、微滴式数字 PCR （ ddPCR ） 和高效液相色谱（ HPLC ）[7,8]。这些技术不仅耗时，而且由于缺乏标准化的 AAV 定量方法，很难比较不同生产系统和实验室的产量[9]。

来自 Gator Bio 的 AAV 定量

Gator Bio 开发了一种独特的解决方案，以应对准确高效定量 AAV 的需求。

Gator® AAV 探针是基于高特异性抗体的光纤生物传感器，能够直接捕获和快速定量裂解物、柱洗脱液和细胞培养上清液中的不同  AAV 血清型。提供高精度和宽动态范围（ 10⁹– 10¹³ VP/mL ，适用于大多数 AAV 血清型 ）的检测；Gator® AAV 探针为相对耗时和人力的传统方法（ 如 ELISA ）提供了一种快速有效的替代方案。这些探针的可再生性和粗样品耐受性使该方法具有成本效益，并且适合在开发和生产基于 AAV 的基因疗法的多个阶段进行使用。

Gator Bio （ 小鳄生物 ）是世界领先的 BLI 系统和解决方案开发商。想要了解更多有关 Gator Bio 的 AAV 定量解决方案信息，请立即与我们联系。

参考文献和延伸阅读

1. Grieger, J. C. & Samulski, R. J. Adeno-associated Virus as a Gene Therapy Vector: Vector Development, Production and Clinical Applications. in Gene Therapy and Gene Delivery Systems (eds. Schaffer, D. V. & Zhou, W.) vol. 99 119–145 (Springer-Verlag, 2005).
2. Zinn, E. & Vandenberghe, L. H. Adeno-associated virus: fit to serve. Curr Opin Virol 8, 90–97 (2014).
3. Naso, M. F., Tomkowicz, B., Perry, W. L. & Strohl, W. R. Adeno-Associated Virus (AAV) as a Vector for Gene Therapy. BioDrugs 31, 317–334 (2017).
4. How does gene therapy work?: MedlinePlus Genetics. https://medlineplus.gov/genetics/understanding/therapy/procedures/.
5. Dobnik, D. et al. Accurate Quantification and Characterization of Adeno-Associated Viral Vectors. Front. Microbiol. 10, 1570 (2019).
6. Ai, J., Ibraheim, R., Tai, P. W. L. & Gao, G. A Scalable and Accurate Method for Quantifying Vector Genomes of Recombinant Adeno-Associated Viruses in Crude Lysate. Human Gene Therapy Methods 28, 139–147 (2017).
7. D’Costa, S. et al. Practical utilization of recombinant AAV vector reference standards: focus on vector genomes titration by free ITR qPCR. Mol Ther Methods Clin Dev 5, 16019 (2016).
8. Dorange, F. & Le Bec, C. Analytical approaches to characterize AAV vector production & purification: Advances and challenges. Cell and Gene Therapy Insights 4, 119–129 (2018).
9. Aucoin, M. G., Perrier, M. & Kamen, A. A. Critical assessment of current adeno-associated viral vector production and quantification methods. Biotechnology Advances 26, 73–88 (2008).