介绍

腺相关病毒( AAV )是基因治疗中体内基因递送的主要方式。基因治疗开发过程中,对 AAV 衣壳浓度进行精确的测定,是前期研发、中期筛选中获得可靠数据,后期治疗中能够安全有效给药的必要条件。生物膜干涉( BLI )使用 AAV 特异性光纤生物传感器可快速非标记定量多种血清型 AAV 滴度。

Gator® AAVX 探针

Gator® AAVX 探针是一种基于高特异性抗体的光纤生物传感器,能够直接结合和定量粗制裂解物、柱洗脱物、细胞裂解物和细胞培养上清液中多种血清型 AAV ,可替代传统较为耗时的分析方法,如 qPCR 、ddPCR 、Dot blot 和 ELISA 。Gator® AAVX 使用经验证具有高亲和力和高特异性的抗 AAVX 抗体 - CaptureSelect™( Thermo Fisher Scientific )。

性能总结

  • 检测范围:1 x 109 – 1 x 1013 vp/mL,适用于大多数 AAV 血清型
  • 通量:8 个样品只需 10 分钟,96 个样品约 120 分钟
  • 检测下限:通常为 5 x 108 vp/mL( 取决于不同血清型 )
  • 适用于粗制样品
  • 性质稳定,适用于较宽的 pH 范围
  • 性价比高 – 可再生重复使用至少 10 次

结果

检测动态范围:

使用 Gator® AAVX 探针测试 AAV2 血清型浓度检测范围。数据显示 AAVX 探针能达到 4 个数量级的定量动态范围。实验参数:样本进行 1:3 稀释,反应时间 10 分钟,转速 1000 rpm 。

准确性和重复性

使用 AAV5 血清型来测试探针准确性和重复性。

下表显示回收率接近 100% ,对中高滴度样本 CV 约为 1.5% ,对于低滴度样本 CV 约为 10.9% 。

不同 AAV 血清型的结合起始斜率( Binding rate )

测试了 8 种不同血清型 AAV 的 Binding rate 。下图展示了不同血清型 AAV 在 2 x 1011 vp/mL浓度下的 Binding rate 。

再生性能

以下数据展示了同一根探针再生 10 次的性能。再生 10 次后其Binding rate未降低。

Gator Bio 系统

GatorTM AAVX 探针

GatorTM Prime 或 GatorTM Plus

Gator Bio 软件

订购信息

PL168-160017: GatorTM AAVX 探针


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